Anticorps monoclonaux souris & rats

Développement et Production d'anticorps monoclonaux de souris et rat
Phage display & Hybridome

BIOTEM dispose d’une expertise particulièrement reconnue en matière de génération d’anticorps monoclonaux de souris et de rat de hautes affinités et spécificités.

Avec la réalisation de plus de 150 projets chaque année, l’équipe BIOTEM a un savoir-faire et des technologies exclusives adaptées aux cibles les plus complexes (protéines membranaires, petites molécules, cibles conservées, etc.).

Le développement d’anticorps monoclonaux repose principalement sur 2 technologies : les hybridomes ou le Phage Display (anticorps recombinants).

Un projet de développement d’anticorps monoclonaux s’articule autour de plusieurs phases durant lesquelles le client a la possibilité de tester le matériel et de décider la poursuite du projet ou non (Go/ No Go).

BIOTEM ne revendique aucune propriété intellectuelle ou autre droit sur les anticorps

Au cours des différentes étapes, BIOTEM met en place :

  • Une gestion opérationnelle optimisée des projets
  • Des contrôles qualité stricts
  • Un accompagnement personnalisé
  • Des tests chez le client tout au long du programme
  • Spécifications

    du projet

    1. Les spécifications du projet

    Pour chaque cas, notre équipe explore avec le client les enjeux du projet et, ensemble, ils définissent le cahier des charges.

    • La cible d'intérêt : protéine membranaire, peptide, petite molécule, modifications post-traductionnelles, etc.
    • Les applications : ELISA, WB, FACS, IF, IHC, IP, tests fonctionnels, application diagnostique ou thérapeutique, etc.
    • Les particularités : Matériel disponible, spécificité, délais, etc.
    En prenant en compte ces multiples paramètres BIOTEM propose une ou plusieurs stratégies sur-mesure afin de répondre au cahier des charges du client et garantir le succès du projet.
  • Immunisation

    souris & rat

    2. Immunisation souris & rat

    En fonction de la demande et des spécifications du client, BIOTEM dispose d’un large panel de stratégies d’immunisations qui ont fait leurs preuves pour l’obtention d’anticorps de haute affinité et spécificité. Des méthodologies adaptées sont développées afin de s’assurer que la réponse immunitaire appropriée soit atteinte.

    A l’issue de cette phase BIOTEM pourra proposer un contrat avec engagement de résultats. Le client aura également la possibilité de tester les sérums dans son propre système.
    • Immunisation protéique : De la production de la protéine recombinante (transfection transitoire en CHO - En savoir +) à sa préparation pour les immunisations, BIOTEM peut vous accompagner sur cette étape cruciale du projet
    • Immunisation peptidique : BIOTEM possède l’expérience et le savoir-faire permettant d'intégrer de façon optimale tous les paramètres et contraintes du design de peptides immunogènes. Stratégie pertinente pour la génération d’anticorps dirigés contre des épitopes présélectionnés, cette approche permet également de s’affranchir des étapes de préparation des immunogènes protéiques
    • Liste non exhaustive (voir aussi Anticorps IHC)
  • Librairie &

    Phage Display

    3. Librairie & Phage Display

    Contrairement aux librairies naïves ou synthétiques, BIOTEM propose la construction de librairies immunes (immune libraries), au format scFv, focalisées sur la cible d’intérêt. Combinée à un criblage haut débit (ou bio-panning) par phage display cette stratégie permet d’optimiser les chances de succès pour l’obtention d’anticorps de haute affinité et de haute spécificité.

    • Sélection d’un grand nombre de candidats scFv (VH+VL uniquement).
    • Criblages optimisés selon différents formats (direct, compétitif, soustractif, etc.) avec différentes conditions de stringences
    • Accès immédiat aux séquences (clones uniques – analyse de la redondance)
    • Production, Purification et Caractérisation des candidats (réactivité, affinité, etc.)

    A l’issue de cette phase le client aura la possibilité de tester les scFv dans son application et sélectionner le ou les meilleurs pour la phase de reformatage en format Ig complète (full Ig) ou autres formats.

  • Reformatage &

    Ingénierie

    4. Reformatage & Ingénierie

    Cette étape permet le passage du format scFv au format immunoglobuline complète  (ou des formats plus "exotiques" : scFv-Fc par exemple) grâce à une plateforme entièrement intégrée pour la production d’anticorps recombinants en cellules mammifères (CHO). En savoir +

    • Différents isotypes et espèces possibles
    • Optimisation de séquences
    • Ingénierie des anticorps (Mutations, Protéine fusion-Fc, anticorps bispécifique, Fab, etc)
    • Génération de variants (chimérisation, humanisation, etc)
    • Production et purification d’un lot pilote

    Envoi du lot pilote pour tests chez le client et choix du ou des candidats finaux pour une production à large échelle.

  • Production &

    purification

    5. Production & purification d'anticorps

    BIOTEM met à disposition sa plateforme de production d’anticorps recombinants par transfection transitoire en cellules CHO pour des productions large échelle. En savoir +

    • Production du milligramme à plusieurs grammes.
    • Compatible « Low endotoxin » (< 10 EU/mg ; voire < 1 EU/mg)
    • Système Serum free
    • Contrôles qualité (concentration, pureté, affinités, agrégation, stabilité, etc.)
  • Spécifications

    du projet

    1. Les spécifications du projet

    Pour chaque cas, notre équipe explore avec le client les enjeux du projet et, ensemble, ils définissent le cahier des charges.

    • La cible d'intérêt : protéine membranaire, peptide, petite molécule, modifications post-traductionnelles, etc.
    • Les applications : ELISA, WB, FACS, IF, IHC, IP, tests fonctionnels, application diagnostique ou thérapeutique, etc.
    • Les particularités : Matériel disponible, spécificité, délais, etc.
    En prenant en compte ces multiples paramètres BIOTEM proposera des stratégies sur-mesure afin de répondre aux problématiques du client et garantir le succès du projet.
  • Immunisation

    souris & rats

    2. Immunisation

    En fonction de la demande et des spécifications, BIOTEM dispose d’un large panel de stratégies d’immunisations qui ont fait leurs preuves pour l’obtention d’anticorps de haute affinité et spécificité. Des méthodologies adaptées sont développées afin de s’assurer que la réponse immunitaire appropriée soit atteinte.

    A l’issue de cette phase BIOTEM pourra proposer un contrat avec engagement de résultats. Le client aura également la possibilité de tester les sérums dans son application.
    • Immunisation protéique : De la production de la protéine recombinante (transfection transitoire en CHO - En savoir +) à sa préparation pour les immunisations, BIOTEM peut vous accompagner sur cette étape cruciale du projet
    • Immunisation peptidique : BIOTEM possède l’expérience et le savoir-faire permettant d'intégrer de façon optimale tous les paramètres et contraintes du design de peptides immunogènes. Stratégie pertinente pour la génération d’anticorps dirigés contre des épitopes présélectionnés, cette approche permet également de s’affranchir des étapes de préparation des immunogènes protéiques (voir aussi IHC Peptide Profiler® ).
    • Protocole R.A.D® (Exclusivité) : Rapid Antibody Development permet le développement rapide d’hybridomes en moins de 1 mois et offre la possibilité de travailler sur des cibles très conservées.
    • Protocole S.S.I (Exclusivité) : Small Size Immunogen, protocole optimisé pour les cibles de petite taille (<30 kDa).
    • Immunisation soustractive : Ces techniques sont particulièrement utiles pour générer des anticorps dirigés contre des cibles très homologues et/ou des épitopes peu immunogéniques.
    • Autres - Petites molécules (haptènes), Immunisation génétique, cellulaire ou in vitro : Des solutions adaptées quand les immunogènes sont difficilement disponibles ou dans le cas de cibles toxiques.
  • Fusion &

    Criblages

    3. Fusion & criblage des hybridomes

    En fonction des résultats obtenus lors de la Phase I, la décision d’initier la Phase II reviendra au client (Go/ No Go). Avec son expertise, BIOTEM propose des méthodes de criblages optimisées afin d’identifier les meilleurs hybridomes (stade polyclonal).

    • Fusion : Les lymphocytes B issus de la rate sont fusionnés à un myélome afin d’obtenir des hybridomes (immortalisation).
    • Criblages : Étape cruciale du projet, les criblages permettent d’isoler les clones réactifs et spécifiques. Les méthodes utilisées sont adaptées pour chaque projet en fonction des spécifications du client (classique, compétitif, criblages multiples, etc.). Plusieurs tours de criblages sont en général réalisés avec le maintien des hybridomes tout au long du process
    • Confirmations : Les clones positifs issus du criblage sont ensuite retestés. A cette étape le client aura la possibilité de tester les clones positifs dans son application.
    • Banque d’ampoules : Après les tests réalisés par le client, les hybridomes sélectionnés sont sécurisés.
  • Clonage

    Hybridomes

    4. Clonage des Hybridomes

    Les hybridomes sélectionnés par le client sont ensuite clonés (dilution limite). Cette étape est nécessaire pour l’obtention de lignées monoclonales stables. Une banque validée de cellules (cryotubes) sera effectuée avec notamment un contrôle de la viabilité.

    Le client aura la possibilité de recevoir les surnageants intermédiaires pour réaliser des tests complémentaires dans son application.

    Les cryotubes peuvent être transférés au client ou mis au gardiennage dans des containers sécurisés à BIOTEM pour les futures productions (En savoir +).

  • Production &

    purification

    5. Production & purification des anticorps

    BIOTEM propose différentes solutions pour la production et la purification des anticorps issus d’hybridomes. De la production de lot pilote jusqu’aux productions à large échelles, l’équipe BIOTEM adapte les procédés à la demande. Des productions en conditions Low Bovine IgG et Low Endotoxin (< 10 EU/mg ; voire < 1 EU/mg) peuvent également être proposées.

    • Production in vitro : Flasque, HYPERFlask®, CELLine, Bioréacteurs, etc.
    • Production in vivo : Production en liquide d’ascite conformément à la réglementation en vigueur
    • Purifications : Chromatographie d’affinité, précipitation, exclusion de taille, etc. En savoir +
    Des services additionnels pour la caractérisation d’anticorps (séquençage, détermination des constantes d'affinité, etc.) ou la modification (couplage, fragmentation, etc.) sont également proposés.

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