Anticorps recombinants à partir de banques synthétiques

anticorps monoclonaux recombinants

Criblage de banques non-immunes par Phage display

En exergue de son expertise en immunotechnologies, BIOTEM propose désormais à ses clients l’accès à des banques synthétiques de régions variables – également désignées banques naïves car non-immunes – de haute qualité afin d’identifier rapidement par Phage Display des anticorps recombinants aux excellents attributs.

  • Banque de VHH (nanobodies) humanisés
  • Banque de scFv humains (bientôt disponible)

Le fait en 2022 d’être une banque synthétique nouvelle veut dire que le design a bénéficié de 3 décennies d’approfondissement du sujet, de discernement sur ce qui est souhaitable ou ce qui est inutile, voire délétère, et des travaux de nombreuses équipes.

Cette longue période de maturation permet d’atteindre aujourd’hui la quintessence et d’apporter deux types de progrès :

  • D’une part une taille nécessaire et suffisante qui garantit la haute diversité de la banque. De fait, les niveaux de combinatoires générés par les synthèses d’ADN de dernière génération, la précision « chirurgicale » et l’homogénéité des modulations (l’assurance d’une variabilité 100 % maitrisée) sont incommensurables par rapport à ce qui se passait au début de l’aventure des banques naïves.
  • D’autre part, l’exclusion – désormais possible dès la conception de la banque – de combinaisons néfastes qui, tout en étant affines, sont susceptibles de mener à des anticorps non exploitables car instables, sujets à l’oxydation prématurée, etc., et/ou, plus en aval, susceptibles de provoquer des hypersensibilités médicamenteuses.

Cette offre « clé en main » vient compléter les services de génération de banques immunes focalisées sur des immunogènes d’intérêts. Elle peut être une alternative aux immunisations dans le cas de cibles toxiques, peu immunogéniques, très conservées ou correspondant parfois à des fonctions vitales.

Cette solution permet également l’obtention d’anticorps très rapidement, en supprimant la phase d’immunisation qui peut prendre plusieurs mois dans certains cas. Également à noter, l’absence de cette phase permet d’économiser les efforts et les coûts de production / purification de grandes quantités d’immunogènes.

Si nécessaire, les candidats identifiés lors des premières étapes de criblage pourront faire l’objet d’une optimisation de séquence/ maturation d’affinité afin d’en améliorer les caractéristiques. BIOTEM pourra également proposer un large panel de services associés dans le but de caractériser et produire ces anticorps en conditions GMP-like grâce à sa plateforme de production d’anticorps recombinants.

BIOTEM ne revendique aucune propriété intellectuelle ou autre droit sur les anticorps

Les avantages généraux des librairies synthétiques pour l’obtention d’anticorps :

  • Rapide (6 à 8 semaines)
  • Technologie animal-free
  • Nécessite peu d’antigène (< 100 µg)
  • Adaptées aux cibles non-immunogéniques
  • Adaptées aux cibles toxiques.
  • Caractéristiques

    Banque VHH

    1. Caractéristiques Banque VHH BIOTEM propose une banque synthétique de VHH humanisés. Grâce à leur petite taille (15 kDa), les VHH peuvent passer certaines barrières physiologiques et pourraient être plus efficaces en santé humaine et animale. De plus, contrairement aux anticorps IgG conventionnels, les VHH sont capables de se lier à des régions moins exposées et à des épitopes cryptiques avec une très grande spécificité et une solubilité exceptionnelle, offrant ainsi de multiples avantages en tant qu’outils thérapeutiques. Cette banque présente de nombreux avantages par rapport aux banques disponibles sur le marché :
    • Design optimisé : grâce au savoir-faire de notre équipe, BIOTEM propose une banque d'anticorps de très haute stabilité (pH, température, protéase)
    • Adapté à tous types d'applications : de la recherche (cristallographie), au diagnostic et aux études pré-cliniques en thérapeutique grâce à leur pré-humanisation
    • Reformatage facilité : avec sa chaîne unique, de nombreuses possibilités de production selon différents formats recombinants (bivalent, tétravalent, etc.)
    • Diversité > 109 : permettant d'optimiser les chances de succès d'obtention d'anticorps après criblage
    • 100% libre de droit : BIOTEM ne revendique aucun droit sur les anticorps issus de la banque
  • Spécifications

    du projet

    2. Les spécifications du projet

    L'équipe BIOTEM explore avec le client les enjeux  de chaque projet afin de bien comprendre ses spécifications. En prenant en compte l'ensemble des paramètres BIOTEM pourra ainsi orienter le client vers les stratégies les plus adaptées à la réussite du projet

    • La cible d'intérêt : protéine membranaire, peptide, petite molécule, modifications post-traductionnelles, etc.
    • Les applications : ELISA, WB, FACS, IF, IHC, IP, tests fonctionnels, application diagnostique ou thérapeutique, etc.
    • Les particularités : Matériel disponible, spécificité, délais, etc.
  • Criblage

    Phage Display

    3. Criblage Phage Display

    En fonction de la cible d'intérêt et des critères du client, les équipes proposeront un criblage haut débit adapté (ou bio-panning) par phage display afin d'identifier les meilleurs candidats avec un accès direct aux séquences.

    • Sélection des VHH humanisés en quelques semaines
    • Criblages standards ou optimisés selon les spécifications du client
    • Accès immédiat aux séquences (clones uniques – analyse de la redondance)
    • Production, Purification et Caractérisation des candidats (réactivité, affinité, etc.)

    A l’issue de cette phase le client aura la possibilité de tester les VHH dans son application et sélectionner le ou les meilleurs candidats pour une optimisation/ production large échelle.

  • Optimisation &

    Production

    4. Optimisation & Production large échelle

    En fonction des résultats obtenus après criblage, le client aura la possibilité de sélectionner le meilleur candidat pour réaliser une optimisation de séquence/ maturation d'affinité (si nécessaire) et lancer une production large échelle.

    BIOTEM dispose également d'un panel de services d'ingénierie d'anticorps permettant entre autres de reformater les VHH en différents formats (VHH-Fc, bivalent, tétravalent, etc.) grâce sa plateforme de production d’anticorps recombinants par transfection transitoire en cellules CHO. En savoir +
    • Production du milligramme à plusieurs grammes
    • Compatible « Low endotoxin » (< 10 EU/mg ; voire < 1 EU/mg)
    • Système Serum free
    • Grade GMP-like
    • Contrôles qualité (concentration, pureté, affinités, agrégation, stabilité, etc.).
  • Caractéristiques

    Banque scFv

    Contenu
  • Spécifications

    du projet

    1. Les spécifications du projet

    Pour chaque cas, notre équipe explore avec le client les enjeux du projet et, ensemble, ils définissent le cahier des charges.

    • La cible d'intérêt : protéine membranaire, peptide, petite molécule, modifications post-traductionnelles, etc.
    • Les applications : ELISA, WB, FACS, IF, IHC, IP, tests fonctionnels, application diagnostique ou thérapeutique, etc.
    • Les particularités : Matériel disponible, spécificité, délais, etc.
    En prenant en compte ces multiples paramètres BIOTEM proposera des stratégies sur-mesure afin de répondre aux problématiques du client et garantir le succès du projet.
  • Criblage

    Phage Display

    2. Criblage de la banque par Phage Display

    En fonction des résultats obtenus lors de la Phase I, la décision d’initier la Phase II reviendra au client (Go/ No Go). Avec son expertise, BIOTEM propose des méthodes de criblages optimisées afin d’identifier les meilleurs hybridomes (stade polyclonal).

    • Fusion : Les lymphocytes B issus de la rate sont fusionnés à un myélome afin d’obtenir des hybridomes (immortalisation).
    • Criblages : Étape cruciale du projet, les criblages permettent d’isoler les clones réactifs et spécifiques. Les méthodes utilisées sont adaptées pour chaque projet en fonction des spécifications du client (classique, compétitif, criblages multiples, etc.). Plusieurs tours de criblages sont en général réalisés avec le maintien des hybridomes tout au long du process
    • Confirmations : Les clones positifs issus du criblage sont ensuite retestés. A cette étape le client aura la possibilité de tester les clones positifs dans son application.
    • Banque d’ampoules : Après les tests réalisés par le client, les hybridomes sélectionnés sont sécurisés.
  • Optimisation &

    Production

    3. Optimisation & Production large échelle En fonction des résultats obtenus à l'étape 3, le client aura la possibilité de sélectionner le meilleur candidat pour réaliser une optimisation de séquence/ maturation d'affinité (si nécessaire) et lancer une production large échelle. BIOTEM met à disposition sa plateforme de production d’anticorps recombinants par transfection transitoire en cellules CHO. En savoir +
    • Production du milligramme à plusieurs grammes
    • Compatible « Low endotoxin » (< 10 EU/mg ; voire < 1 EU/mg)
    • Système Serum free
    • Grade GMP-like
    • Contrôles qualité (concentration, pureté, affinités, agrégation, stabilité, etc.).

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