Anticorps monoclonaux de lapins par
Phage display
Les anticorps monoclonaux de lapins présentent naturellement de hautes affinités et spécificités ainsi que la capacité de lier une très grande diversité d’épitopes parmi lesquels, en particulier mais pas seulement, les épitopes de plus petites tailles et les phospho-épitopes. Au cours de l’immunisation, les mutations somatiques dans les domaines variables VH et VL sont plus fréquentes que chez la souris ou chez l’humain et les domaines VH accumulent deux tiers de mutations supplémentaires, tandis que les domaines VL voient les régions charpentes FR1 et FR3 concentrer un plus grand nombre de changements par rapport aux séquences germinales. Enfin, la boucle CDR3 de la chaîne légère est plus longue que dans les anticorps humains ou de souris. Ces différences structurales font que les anticorps monoclonaux de lapin constituent une classe de réactifs à très haute valeur ajoutée pour des applications en recherche et dans le domaine du diagnostic.
BIOTEM ne revendique aucune propriété intellectuelle ou autre droit sur les anticorps
- Détection de petites molécules (haptènes) et molécules non protéiques
- Développement d’immunoessais (limite de détection très basse)
- Détection de modifications post-traductionnelles (phosphorylation, acétylation, etc.)
- Utilisation optimale en IHC / IF (bruit de fond réduit)
- Détection d’antigènes dans des échantillons murins
Spécifications
du projet
1. Les spécifications du projet
Pour chaque cas, notre équipe explore avec le client les enjeux du projet et, ensemble, ils définissent le cahier des charges.
- La cible d'intérêt : protéine membranaire, peptide, petite molécule, modifications post-traductionnelles, etc.
- Les applications : ELISA, WB, FACS, IF, IHC, IP, tests fonctionnels, applications diagnostiques, etc.
- Les particularités : Matériel disponible, spécificité, délais, etc.
En prenant en compte ces multiples paramètres BIOTEM propose une ou plusieurs stratégies sur-mesure afin de répondre au cahier des charges du client et garantir le succès du projet.
Immunisation
Lapins
2. Immunisation Lapins
En fonction de la demande et des spécifications du client, BIOTEM dispose d’un large panel de stratégies d’immunisations qui ont fait leurs preuves pour l’obtention d’anticorps de hautes affinités et spécificités. Des méthodologies adaptées sont développées afin de s’assurer que la réponse immunitaire appropriée soit atteinte.
A l’issue de cette phase BIOTEM pourra proposer un contrat avec engagement de résultats. Le client aura également la possibilité de tester les sérums dans son application et/ou son propre système expérimental.
- Immunisation protéique : De la production de la protéine recombinante (transfection transitoire en CHO) à sa préparation pour les immunisations, BIOTEM peut vous accompagner sur cette étape cruciale du projet
- Immunisation peptidique : BIOTEM possède l’expérience et le savoir-faire permettant d'intégrer de façon optimale tous les paramètres et contraintes du design de peptides immunogènes. Stratégie pertinente pour la génération d’anticorps dirigés contre des épitopes présélectionnés, cette approche permet également de s’affranchir des étapes de préparation des immunogènes protéiques (voir aussi IHC Peptide Profiler®)
- Autres – Immunisation petites molécules
- Liste non exhaustive
Librairie &
Phage Display
3. Librairie & Phage Display
Contrairement aux librairies naïves ou synthétiques, BIOTEM propose la construction de librairies immunes (immune libraries), au format scFv, focalisées sur la cible d’intérêt. Combinée à un criblage haut débit (ou bio-panning) par phage display cette stratégie permet d’optimiser les chances de succès pour l’obtention d’anticorps de haute affinité et de haute spécificité.- Sélection d’un grand nombre de candidats scFv (VH+VL uniquement).
- Criblages optimisés selon différents formats (direct, compétitif, soustractif, etc.) avec différentes conditions de stringences
- Accès immédiat aux séquences (clones uniques – analyse de la redondance)
- Production, Purification et Caractérisation des candidats (réactivité, affinité, etc.)
Reformatage &
Ingénierie
4. Reformatage & Ingénierie
Cette étape permet le passage du format scFv au format immunoglobuline complète (ou des formats plus "exotiques" : scFv-Fc par exemple) grâce à une plateforme entièrement intégrée pour la production d’anticorps recombinants en cellules mammifères (CHO). En savoir +
- Différents isotypes et espèces possibles
- Optimisation de séquences
- Ingénierie des anticorps (Mutations, Protéine fusion-Fc, anticorps bispécifique, Fab, etc)
- Génération de variants (chimérisation, humanisation, etc)
- Production et purification d’un lot pilote
Production &
purification
5. Production & purification
BIOTEM met à disposition sa plateforme de production d’anticorps recombinants par transfection transitoire en cellules CHO pour des productions large échelle. En savoir +- Production du milligramme à plusieurs grammes.
- Compatible « Low endotoxin » (< 10 EU/mg ; voire < 1 EU/mg)
- Système Serum free
- Contrôles qualité (concentration, pureté, affinités, agrégation, stabilité, etc.)
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