Anticorps thérapeutiques à partir de donneurs immunisés
Les anticorps thérapeutiques et leurs dérivés (fragments d’anticorps, conjugués de type ADC ou Antibody Drug Conjugate, etc.) constituent aujourd’hui le segment du marché biopharmaceutique le plus dynamique. En effet, les propriétés inégalées des anticorps en termes de spécificité, d’affinité et de stabilité font de ces molécules des agents thérapeutiques de tout premier choix.
Afin de réduire leur immunogénicité et d’accroître leur efficacité, les anticorps thérapeutiques ont progressivement évolué d’un format murin vers des formats recombinants comprenant des proportions de séquences humaines toujours plus importantes. Ainsi, les anticorps chimériques ont été les premiers anticorps recombinants générés mais assez rapidement supplantés par les anticorps humanisés et par des anticorps dits 100 % humains. Ces derniers constituent aujourd’hui les anticorps thérapeutiques les plus plébiscités dans les demandes d’autorisations de mise sur le marché.
BIOTEM ne revendique aucune propriété intellectuelle ou autre droit sur les anticorps
- Exploitation de la réponse immunitaire humaine
- Système de criblage robuste
- Validation des clones intermédiaires et finaux par le client
Spécifications
du projet
1. Les spécifications du projet
Pour chaque cas, notre équipe explore avec le client les enjeux du projet et, ensemble, ils définissent un cahier des charges précis en fonction de :
- La cible d'intérêt : virus, bactéries, autres agents pathogènes, etc.
- Les particularités : Accès à des donneurs immunisés, antigène de criblage, spécificité, etc.
En prenant en compte ces multiples paramètres BIOTEM propose des solutions sur mesure afin de répondre aux problématiques du client et de garantir le succès du projet.
Sélection
de donneurs
2. La sélection de donneurs
La stratégie proposée par BIOTEM pour générer des anticorps monoclonaux 100 % humains consiste à construire une librairie immune à partir de matériel biologique issus de donneurs (en l’occurrence, souvent des patients) naturellement immunisés contre une cible d’intérêt (un virus, une bactérie...).
L’identification de donneurs potentiels ayant générés une réponse immunitaire adéquate constitue un des objectifs prioritaires du projet.
Librairie &
Phage Display
3. Librairie & Phage Display
Contrairement aux librairies naïves ou synthétiques, BIOTEM propose la construction d’une librairie immune (immune library), au format scFv, focalisée sur la cible d’intérêt combinée à un criblage haut débit (ou bio-panning) par phage display. Cela permet d’optimiser les chances de succès pour l’obtention d’anticorps de haute affinité et de haute spécificité.- Sélection d’un grand nombre de candidats scFv (VH+VL uniquement)
- Criblages optimisés avec différentes conditions de stringences (direct, compétitif, soustractif, etc.)
- Accès immédiat et automatique aux séquences (clones uniques – analyse de la redondance)
- Production, Purification et Caractérisation des candidats (réactivité, affinité, etc.).
A l’issue de cette phase le client aura la possibilité de tester les scFv dans son application et sélectionner le ou les meilleurs pour la phase de reformatage en format Ig complète (full Ig) ou autres formats.
Reformatage
ingénierie
4. Reformatage & Ingénierie
Cette étape permet le passage du format scFv au format immunoglobuline complète (ou des formats plus "exotiques" : scFv-Fc par exemple) grâce à une plateforme entièrement intégrée pour la production d’anticorps recombinants en cellules mammifères (CHO). En savoir +
- Différents isotypes et espèces possibles
- Optimisation de séquences
- Ingénierie des anticorps (Mutations, Protéine fusion-Fc, anticorps bispécifique, Fab, etc)
- Génération de variants (chimérisation, humanisation, etc)
- Production et purification d’un lot pilote
Production &
purification
5. Production & purification
BIOTEM met à disposition sa plateforme de production d’anticorps recombinants par transfection transitoire en cellules CHO pour des productions large échelle. En savoir +
- Production du milligramme à plusieurs grammes.
- Compatible « Low endotoxin » (< 10 EU/mg ; voire < 1 EU/mg)
- Système Serum free
- Ingénierie des anticorps
- Contrôles qualité (concentration, pureté, affinités, agrégation, stabilité, etc.)
Spécifications
du projet
1. Les spécifications du projet
Pour chaque nouveau cas, l’équipe BIOTEM explore avec le client les enjeux du projet et ensemble ils définissent un cahier des charges précis en fonction de :
- La cible d'intérêt : virus, bactéries, autres agents pathogènes, etc.
- Les particularités : Accès à des donneurs immunisés, antigène de criblage, spécificité, etc.
En prenant en compte ces multiples paramètres BIOTEM propose des solutions sur mesure afin de répondre aux problématiques du client et de garantir le succès du projet.
Sélection
de donneurs
2. La sélection de donneurs
La stratégie proposée par BIOTEM pour générer des anticorps monoclonaux 100% humains consiste à immortaliser des cellules exprimant naturellement des anticorps humains spécifiques d’une cible d’intérêt (un virus, une bactérie...)
L'identification de donneurs potentiels ayant généré une réponse immunitaire adéquate constitue donc un des objectifs prioritaires du projet.Enrichissement
et immortalisation
3. Enrichissement et immortalisation
- Sélection : Les PBMCs (Peripherical Blood Mononuclear Cells), contenant notamment les lymphocytes B mémoires (cellules cibles), sont extraits du sang total par gradient de densité. BIOTEM a développé différentes stratégies d’enrichissement permettant d’optimiser les étapes suivantes du projet (activation et immortalisation).
- Activation cellulaire : L’activation des cellules sélectionnées permet d’optimiser considérablement les rendements d’immortalisation (proches de 100 %). Cette étape est réalisée in vitro selon des procédés et un savoir-faire développés par BIOTEM.
- Immortalisation EBV (Epstein Barr Virus) : L’étape d’immortalisation est réalisée par mise en contact des cellules activées avec des particules virales EBV. Les cellules se différencient alors en LCLs (Lymphoblastoid Cell Lines), caractérisées par une capacité de prolifération et de sécrétion d’anticorps.
Criblages
& clonage
4. Criblages & clonage
Etape cruciale du projet, les criblages permettent d’isoler les clones réactifs et spécifiques. Les méthodes utilisées sont adaptées pour chaque projet en fonction des spécifications du client (classique, compétitif, criblages multiples, etc.). Les clones positifs issus du criblage sont ensuite confirmés (stade polyclonal).
Les candidats sélectionnés par le client sont ensuite clonés et stabilisés (dilution limite). Cette étape est nécessaire pour l’obtention de lignées monoclonales. Une banque validée de cellules (cryotubes) sera effectuée avec notamment un contrôle de la viabilité.
Production
& purification
5. Production & purification
BIOTEM propose différentes solutions pour la production et la purification des anticorps issus d’hybridomes. De la production de lot pilote jusqu’aux productions à large échelles, l’équipe BIOTEM adapte les procédés à la demande. Des productions en conditions Low Bovine IgG et Low Endotoxin (< 10 EU/mg) peuvent également être proposées. En savoir +
- Production in vitro : Flasque, HYPERFlask®, CELLine, Bioréacteurs, etc.
- Production in vivo : Production en liquide d’ascite conformément à la réglementation en vigueur
- Purifications : Chromatographie d’affinité, précipitation, exclusion de taille, etc.
Des services additionnels comme la caractérisation d’anticorps (séquençage, affinité, etc.) ou la modification (couplage, fragmentation, etc.) sont également proposés.
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