Ultimate Humanization® : Nouvelle génération d’anticorps thérapeutique
La plateforme Ultimate Humanization® combine judicieusement différentes technologies (in vivo et in vitro) afin de générer des anticorps thérapeutiques à forte valeur ajoutée. Les anticorps générés présentent des propriétés optimales en termes de faibles immunogénicité et toxicité (« off-target recognition ») chez l’homme permettant ainsi de maximiser les chances succès durant les phases précliniques et cliniques.
L’Index de Germinalité (GI) définit le pourcentage d’identité des régions variables d’un anticorps avec les séquences germinales humaines de l’anticorps le plus proche. Les anticorps codés par les gènes germinaux (IgM, GI = 100%) forment le véritable soi immunologique et sont parfaitement tolérés. La maturation d’affinité des anticorps humains (IgG) induit la génération d’anticorps de plus hautes affinités et spécificités mais souvent au détriment de la germinalité, les anticorps conservés par l’organisme ayant généralement un GI compris entre 88 % et 96 %.
Au cours de l’amélioration in silico d’anticorps recombinants (antibody engineering), des mutations sont introduites afin d’optimiser les séquences hypervariables, déclenchant ainsi une baisse du GI. Plus on s’éloigne d’un GI de 100 %, plus des associations non tolérées d’acides aminés sont possibles. Il s’agit d’un risque potentiel observé sur des anticorps recombinants ayant subi de fortes ingénieries et possédant un faible GI (< 88 %) qui sont souvent associés à des effets secondaires graves.
Afin de réduire ces problèmes de tolérance, grâce à la mise en oeuvre de la technologie Ultimate Humanization® BIOTEM garantit un GI minimum de 92 % (généralement > 95 %) tout en conservant l’affinité parentale.
BIOTEM ne revendique aucune propriété intellectuelle ou autre droit sur les anticorps.
Avantages de la plateforme Ultimate Humanization® :
- Banque hyper-immune par immunisation de macaques : Hautes affinités et spécificités
- Anticorps parents quasi-humains : Toxicité & cross-réactivité réduites
- Criblage haut débit par Phage Display
- Index de germinalité (GI) garanti >92%
- Optimisation de séquence : améliorer la drugabilité et manufacturabilité.
Les spécifications
projet
1. Spécifications projet
Pour chaque problématique, l’équipe BIOTEM explore avec le client les enjeux du projet et, ensemble, ils définissent un cahier des charges précis en fonction de :
- La cible d’intérêt : Protéine membranaire, peptide, petite molécule, modifications post-traductionnelles, etc.
- Les applications thérapeutiques
- Les particularités : Disponibilité du matériel (immunogène / antigène / cellules / virus), spécificité, délais, etc.
Immunisation
Macaques
2. Immunisation Macaques
En fonction de la demande et des spécifications, BIOTEM dispose d’un large panel de stratégies d’immunisations qui ont fait leurs preuves pour l’obtention d’anticorps de hautes affinités et spécificités. Des méthodologies adaptées sont développées afin de s’assurer que la réponse immunitaire appropriée soit atteinte. A l’issue de cette phase BIOTEM pourra proposer un contrat avec engagement de résultats. Le client aura également la possibilité de tester les sérums dans son système d’étude.Librairie
Phage Display
3. Librairie & Phage Display
Contrairement aux librairies naïves ou synthétiques, BIOTEM propose la construction de librairies immunes (immune libraries), au format scFv, focalisées sur la cible d’intérêt. Combinée à un criblage haut débit (ou bio-panning) par phage display cette stratégie permet d’optimiser les chances de succès pour l’obtention d’anticorps de haute affinité et de haute spécificité.
- Sélection d’un grand nombre de candidats scFv (VH+VL uniquement).
- Criblages optimisés selon différents formats (direct, compétitif, soustractif, etc.) avec différentes conditions de stringences
- Accès immédiat aux séquences (clones uniques – analyse de la redondance)
- Production, Purification et Caractérisation des candidats (réactivité, affinité, etc.)
A l’issue de cette phase le client aura la possibilité de tester les scFv dans son application et sélectionner le ou les meilleurs pour la phase de reformatage en format Ig complète (full Ig) ou autres formats.
Germinalisation &
optimisation
4. Germinalisation & optimization
Germinalisation
Contrairement aux anticorps dérivés d’espèces phylo-génétiquement éloignées de l'humain (souris, rats, lamas,…), les anticorps parentaux obtenus avec la plateforme Ultimate Humanization® peuvent être facilement et extensivement germinalisés dans les régions charpentes (FR) et hypervariables (CDR). Les anticorps ainsi obtenus présentent typiquement des GI supérieurs à 95% tout en conservant l’affinité et la spécificité des anticorps parentaux. La germinalisation extensive est notamment obtenue grâce à la germinalisation des régions CDR lesquelles sont prédites pour être très immunogéniques mais essentielles pour la reconnaissance de l’antigène.
Optimisation de séquences
Afin d’améliorer la drugabilité et d’anticiper la manufacturabilité de l’anticorps, l’offre de BIOTEM inclut une optimisation de séquence si nécessaire :
- Optimisation des propriétés physico-chimique.
- Maturation de l’anticorps.
- Optimisation de codon.
Production &
Purification
5. Production & purification
Cette étape permet le passage du format scFv au format immunoglobuline complète (ou d'autres formats) grâce à une plateforme entièrement intégrée pour la production d’anticorps recombinants en cellules mammifères (CHO), du milligramme à plusieurs grammes. En savoir +
- Production du milligramme à plusieurs grammes.
- Compatible « Low endotoxin » (< 10 EU/mg ; voire < 1 EU/mg)
- Système Serum free
- Ingénierie des anticorps (Isotype, Mutations, Protéine fusion-Fc, anticorps bispécifique, Fab, etc.)
- Génération de variants (chimérisation, humanisation, etc.)
- Contrôles qualité (concentration, pureté, affinités, agrégation SEC-HPLC, stabilité DSC, etc.)
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