Anticorps monoclonaux fonctionnels en immunohistochimie (IHC)
L’Immunohistochimie (IHC) est une méthode analytique très utilisée en anatomo-pathologie mais qui nécessite des traitements importants des échantillons, traitements qui peuvent ainsi modifier significativement la cible d’intérêt. Peu d’anticorps disponibles commercialement ont la capacité d’être performants sur coupes de tissus déparaffinées. BIOTEM dispose de savoir-faire exclusifs qui reposent notamment sur le design et la formulation des immunogènes et antigènes de criblage .
Cette expertise peut s’appliquer à tous les types de programmes de développement d’anticorps en fonction de la demande.
BIOTEM ne revendique aucune propriété intellectuelle ou autre droit sur les anticorps
- IHC Peptide Profiler® : programme exclusif pour le design optimal de peptides
- Formulation IHC : préparation optimisée d’immunogènes et antigènes protéiques
- Caractérisation des anticorps à chaque étape
Technologie de plus en plus répandue, le Phage Display permet la génération d’anticorps en format recombinant issus d’une banque immune construite à partir des animaux immunisés. Cette approche offre la possibilité de tester un grand nombre de clones grâce à un criblage haut débit et permet un accès aux séquences dès les premières phases. Au cours du programme, BIOTEM met en place une gestion opérationnelle optimisée des projets avec des contrôles qualité stricts et un accompagnement personnalisé tout au long du programme.
Spécifications
du projet
1. Les spécifications du projet
Pour chaque cas, notre équipe explore avec le client les enjeux du projet et, ensemble, ils définissent le cahier des charges.
- La cible d'intérêt : protéine membranaire, peptide, petite molécule, modifications post-traductionnelles, etc.
- Les applications : IHC sur coupe congélée, coupe paraffine, etc.
- Les particularités : Disponibilité du matériel (immunogène / antigène / cellules / tissus), spécificité, date limite, etc.
Face à ces multiples paramètres BIOTEM dispose effectivement des outils qui lui permettent de proposer des stratégies réellement sur mesure afin de répondre aux problématiques du client et garantir le succès du projet.
Immunogènes
& Immunisation
2. Immunogène & Immunisation
Design et préparation des immunogènes- IHC Peptide Profiler® : Ce programme exclusif développé par BIOTEM permet le design d’immunogènes peptidiques les plus pertinents dans le cadre du développement d’anticorps monoclonaux fonctionnels en IHC. Une analyse complète de la cible (séquence, structures, modifications...) combinée à une étude multiparamétrique (selon 9 critères spécifiques de la problématique du traitement des antigènes en IHC) permet la sélection et un ranking des meilleurs candidats peptides.
- Formulation IHC d’antigène protéique : BIOTEM dispose de formulations « IHC spécifiques » destinées à modifier de manière subtile les protéines dans le but d’obtenir des immunogènes les plus proches des antigènes ciblés en IHC sur coupes paraffinées. Pour ces formulations, BIOTEM prend en compte la cible (séquences, structures, modifications, …) ainsi que les conditions appliquées sur les coupes de tissus (fixation, chauffage, …)
En fonction de la demande et des spécifications, BIOTEM dispose d’un large panel de stratégies d’immunisations qui ont fait leurs preuves pour l’obtention d’anticorps de haute affinité et spécificité. Des méthodologies adaptées sont développées afin de s’assurer que la réponse immunitaire appropriée soit atteinte.
Librairie &
Phage Display
3. Librairie & Phage Display
Contrairement aux librairies naïves ou synthétiques, BIOTEM propose la construction d’une librairie immune (immune library), au format scFv, focalisée sur la cible d’intérêt combinée à un criblage haut débit (ou bio-panning) par phage display. Cela permet d’optimiser les chances de succès pour l’obtention d’anticorps de haute affinité et de haute spécificité.
- Sélection d’un grand nombre de candidats scFv (VH+VL uniquement)
- Criblages optimisés avec différentes conditions de stringences (direct, compétitif, soustractif, etc.)
- Accès immédiat et automatique aux séquences (clones uniques – analyse de la redondance)
- Production, Purification et Caractérisation des candidats (réactivité, affinité, etc.)
A l’issue de cette phase le client aura la possibilité de tester les scFv et sélectionner le ou les meilleurs pour la phase de reformatage en format Ig complète (full Ig).
Reformatage
& Ingénierie
4. Reformatage & Ingénierie
Cette étape permet le passage du format scFv au format immunoglobuline complète (ou des formats plus "exotiques" : scFv-Fc par exemple) grâce à une plateforme entièrement intégrée pour la production d’anticorps recombinants en cellules mammifères (CHO). En savoir +
- Différents isotypes et espèces possibles
- Optimisation de séquences
- Ingénierie des anticorps (Mutations, Protéine fusion-Fc, anticorps bispécifique, Fab, etc)
- Génération de variants (chimérisation, humanisation, etc)
- Production et purification d’un lot pilote
Envoi du lot pilote pour tests chez le client et choix du ou des candidats finaux pour une production à large échelle.
Production &
purification
5. Production & purification
BIOTEM met à disposition sa plateforme de production d’anticorps recombinants par transfection transitoire en cellules CHO pour des productions large échelle. En savoir +
- Production du milligramme à plusieurs grammes.
- Compatible « Low endotoxin » (< 10 EU/mg ; voire < 1 EU/mg)
- Système Serum free
- Contrôles qualité (concentration, pureté, affinités, agrégation, stabilité, etc.)
Méthode historique et approuvée pour le développement d’anticorps monoclonaux, la technologie des hybridomes est proposée par BIOTEM pour la génération d’anticorps monoclonaux de souris et de rats. Cette approche permet d’intégrer des criblages primaires en IHC. Au cours du programme, BIOTEM met en place une gestion opérationnelle optimisée des projets avec des contrôles qualité stricts et un accompagnement personnalisé tout au long du programme.
Spécifications
du projet
1. Les spécifications du projet
Pour chaque cas, notre équipe explore avec le client les enjeux du projet et, ensemble, ils définissent le cahier des charges.
- La cible d'intérêt : protéine membranaire, peptide, petite molécule, modifications post-traductionnelles, etc.
- Les applications : IHC sur coupe congélée, coupe paraffine, etc.
- Les particularités : Disponibilité du matériel (immunogène / antigène / cellules / tissus), spécificité, date limite, etc.
Face à ces multiples paramètres BIOTEM dispose effectivement des outils qui lui permettent de proposer des stratégies réellement sur mesure afin de répondre aux problématiques du client et garantir le succès du projet.
Immunogène
& immunisation
2. Immunisation & immunisation
Design et préparation des immunogènes
- IHC Peptide Profiler® : Ce programme exclusif développé par BIOTEM permet le design d’immunogènes peptidiques les plus pertinents dans le cadre du développement d’anticorps monoclonaux fonctionnels en IHC. Une analyse complète de la cible (séquence, structures, modifications...) combinée à une étude multiparamétrique (selon 9 critères spécifiques de la problématique du traitement des antigènes en IHC) permet la sélection et un ranking des meilleurs candidats peptides
- Formulation IHC d’antigène protéique : BIOTEM dispose de formulations « IHC spécifiques » destinées à modifier de manière subtile les protéines dans le but d’obtenir des immunogènes les plus proches des antigènes ciblés en IHC sur coupes paraffinées. Pour ces formulations, BIOTEM prend en compte la cible (séquences, structures, modifications, …) ainsi que les conditions appliquées sur les coupes de tissus (fixation, chauffage, …).
Immunisation
En fonction de la demande et des spécifications, BIOTEM dispose d’un large panel de stratégies d’immunisations qui ont fait leurs preuves pour l’obtention d’anticorps de haute affinité et spécificité. Des méthodologies adaptées sont développées afin de s’assurer que la réponse immunitaire appropriée soit atteinte.
Fusion &
Criblages
3. Fusion & criblage
En fonction des résultats obtenus lors de la Phase I, la décision d’initier la Phase II reviendra au client (Go/ No Go). Avec son expertise, BIOTEM propose des méthodes de criblages optimisées afin d’identifier les meilleurs hybridomes (stade polyclonal).
Clonage
hybridomes
4. Clonage hybridomes
Les hybridomes sélectionnés par le client sont ensuite clonés (dilution limite). Cette étape est nécessaire pour l’obtention de lignées monoclonales stables. Une banque validée de cellules (cryotubes) sera effectuée avec notamment un contrôle de la viabilité.
Le client aura la possibilité de recevoir les surnageants intermédiaires pour tester dans son application.
Les cryotubes peuvent être transférés au client ou mis au gardiennage dans des containers sécurisés à BIOTEM pour les futures productions (En savoir +).
Production &
purification
5. Production & Purification
BIOTEM propose différentes solutions pour la production et la purification des anticorps issus d’hybridomes. De la production de lot pilote jusqu’aux productions à larges échelles, l’équipe BIOTEM adapte les procédés à la demande. Des productions en conditions Low Bovine IgG et Low Endotoxin (< 10 EU/mg ; voire < 1 EU/mg) peuvent également être proposées.
- Production in vitro : Flasque, HYPERFlask®, CELLine, Bioréacteurs, etc.
- Production in vivo : Production en liquide d’ascite conformément à la réglementation en vigueur
- Purifications : Chromatographie d’affinité, précipitation, exclusion de taille, etc. En savoir +
Des services additionnels pour la caractérisation d’anticorps (séquençage, détermination des constantes d'affinité, etc.) ou la modification (couplage, fragmentation, etc.) sont également proposés.
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